技術支持Article
細胞因子在體內具有重要的病理作用
點擊次數：1307 更新時間：2022-11-08
細胞因子在體內具有重要的病理作用，在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態下，部分細胞因子會明顯變化，根據這些指標可以判斷機體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應評價,具有重要的應用價值。廣泛應用于細胞生物學、免疫學以及腫瘤學等領域的流式細胞術是細胞因子檢測的一種方法。
CBA(cytometric bead array）法是新發展起來的利用流式細胞術測定細胞因子的新方法，該方法直接檢測分泌到細胞外的處于游離狀態的細胞因子。流式細胞術不能直接檢測細胞因子，CBA技術利用人工合成的微球（如直徑為7.5µm的聚苯乙烯微球）代替細胞，在該做球上包被細胞因子抗體，當待測樣品中含有相應的細胞因子時，人工微球上的抗體能夠與細胞因子結合，然后再加入PE偶聯的抗細胞因子抗體，該PE偶聯抗體就可以與微球上結合的細胞因子結合，形成“三明治夾心”結構。其基本原理與ELISA法檢測細胞因子具有相似之處，只是ELISA法利用的是酶系統，通過使底物顯色，計算顏色的深淺來定量細胞因子，而CBA能利用的是熒光系統，通過激發PE熒光素，分析熒光信號的強弱來定量細胞因子。
CBA穩定性好、可重復性高，能避免酶聯免疫放大技術使信號失真導致的假陽性。
流式細胞術檢測用于細胞因子檢測是一種相對快速、重復性好并能準確定量的方法。但由于胞內分析步驟復雜，涉及變異因素多，可能會出現結果不穩定，較難重復等問題。
如在檢測血清時，由于血清成分復雜，細胞因子含量差距大，實驗中經常會出現分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現象，對實驗結果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成，血清加入微球之后如果沒有充分渦旋，容易沉淀聚集，細胞因子不能充分跟微球結合，導致多群甚至聚集現象發生，檢測結果將是無效的。需要從制備混合微球開始到加入實驗管，直到上機檢測前每一步都必須充分渦旋，以避免微球發生聚集。
