A型口蹄疫抗體檢測試劑盒
使用說明書
【介紹】
A型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）抗體檢測試劑盒可用于檢測豬、牛、羊血清中的A型口蹄疫病毒抗體，用于評估A型口蹄疫苗免疫狀況。
本試劑盒采用間接ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的FMD病毒抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有FMD病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶結(jié)合物，與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。
【組份】
1 | 抗原預(yù)包被板條 | 1/2塊 | 7 | 陰性對照 | 0.8/1.6ml |
2 | 酶結(jié)合物 | 11/22ml | 8 | 陽性對照 | 0.8/1.6ml |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 50/100ml | 9 | 血清稀釋板 | 1/2塊 |
4 | 顯色液 | 11/22ml | 10 | 封板膜 | 2/4張 |
5 | 樣本稀釋液 | 50/100ml | 11 | 說明書 | 1份 |
6 | 終止液 | 6/11ml |
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【需自備的設(shè)備及試劑】
微量移液器： 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
一次性移液器吸頭。量筒：500ml。96孔板酶標(biāo)儀。蒸餾水或去離子水。洗瓶或洗板機(jī)。
【樣品制備】
取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【洗滌液的準(zhǔn)備】
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
【樣品的稀釋】
在血清稀釋板中按1：100的體積比稀釋待檢血清。
注意：陰性和陽性對照不用稀釋。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭，準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位置。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。
【注意事項(xiàng)】
試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時(shí)以上。使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。
不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。
TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。
所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得zui好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。
血清稀釋板為一次性用品，不得重復(fù)使用；血清稀釋板的大容量為300μl/孔。
【操作步驟】
取預(yù)包被的檢測板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時(shí)設(shè)陰性對照和陽性對照各2孔，取陰性及陽性對照各100μl分別加入反應(yīng)孔中輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。
蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪），置37℃溫育30分鐘。
小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，后在干凈吸水紙上拍干。
每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。
小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次, 方法同3。切記zui后在干凈吸水紙上拍干。
每孔加顯色液100µl，輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。
每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。
【結(jié)果判定】
用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。
試驗(yàn)成立的條件是：
陰性對照（N）OD值<0.20，同時(shí)陽性對照（P）OD值>0.3。
計(jì)算方法：
（樣品OD值-陰性O(shè)D均值）÷（陽性對照OD均值-陰性O(shè)D均值）= IRPC值
陰陽性判斷：
IRPC<0.4判為陰性;0.4≤IRPC<0.45判為可疑；IRPC≥0.45則判斷為陽性。
【有效期】
貯存方法： 2 - 8ºC下貯存有效期為 12個(gè)月。
